Abstract INTRODUCTION: Leptospirosis is an important health concern in Brazil. Currently, information on the epidemiology of the disease in the rural areas of the country is lacking. METHODS: Serological and molecular techniques were used to characterize a clinical isolate of Leptospira. RESULTS: The strain CLEP 00060, isolated from a 59-year-old man in a rural area of Rio Grande do Sul state, Brazil, was identified as belonging to L. kirschneri serogroup Pomona serovar Mozdok. CONCLUSIONS: This study contributes to the local epidemiological knowledge of leptospirosis, prevention of the disease by vaccines, and improvements in its diagnosis.

RESUMO Trata-se de um resumo das apresentações, debates e recomendações do Workshop Internacional para Pesquisa em Leptospirose com Base nas Necessidades dos Países do Instituto Oswaldo Cruz/FIOCRUZ e 5a Reunião da Rede Global de Ação Ambiental em Leptospirose, realizados na cidade do Rio de Janeiro, Brasil, de 10 a 12 de novembro de 2015. Os participantes do evento debateram políticas de saúde e elaboraram um guia como documento de consenso para orientar a tomada de decisão pelos responsáveis por políticas, agências de financiamento e profissionais da saúde. Destacou-se o rumo a ser tomado em pesquisa em leptospirose nos próximos anos levando em consideração as necessidades dos países da América Latina, assim como as experiências de outras regiões do mundo, conforme estabelecido por especialistas internacionais. Os conceitos práticos da perspectiva “One Health” (Um Mundo, Uma Saúde) e pesquisa translacional foram a base dos debates e das recomendações conseguintes. Apesar da ampla distribuição geográfica e do seu impacto em termos de incidência, morbidade e mortalidade, a leptospirose ainda não é considerada uma doença “tool ready” para iniciativas globais. Os programas de vigilância precisam de novas ferramentas e estratégias para detecção precoce, prevenção e acompanhamento. As principais recomendações elaboradas na reunião do Rio englobam política de saúde assim como pesquisa e elas devem ser levadas em consideração pelas autoridades, funcionários do governo e Organização Pan-Americana da Saúde. As instituições de pesquisa, universidades e interessados diretos devem atentar para as prioridades em pesquisa, desenvolvimento tecnológico e inovação.

ABSTRACT This report summarizes the presentations, discussions and the recommendations coming from the Oswaldo Cruz Institute/FIOCRUZ International Workshop for Leptospirosis Research Based on Country Needs and the 5th Global Leptospirosis Environmental Action Network meeting, which was held in the city of Rio de Janeiro, Brazil, 10–12 November 2015. The event focused on health policy and worked to develop a road map as a consensus document to help guide decision-making by policymakers, funding bodies, and health care professionals. The direction that leptospirosis research should take in the coming years was emphasized, taking into account the needs of countries of Latin America, as well as experiences from other world regions, as provided by international experts. The operational concepts of “One Health” and translational research underlaid the discussions and the resulting recommendations. Despite the wide geographic distribution of leptospirosis and its impact in terms of incidence, morbidity, and mortality, leptospirosis is not yet considered a “tool-ready” disease for global initiatives. Surveillance programs need new tools and strategies for early detection, prevention, and follow-up. The major recommendations developed at the Rio meeting cover both health policy and research. The health policy recommendations should be taken into account by decisionmakers, government officials, and the Pan American Health Organization. The priorities for research, technological development, and innovation should be considered by research institutions, universities, and stakeholders.

RESUMEN En este informe se resumen las ponencias, los debates y las recomendaciones del taller internacional para la investigación sobre la leptospirosis basada en las necesidades de los países organizado por el Instituto Oswaldo Cruz/FIOCRUZ y la quinta reunión de la Red Global de Acción Ambiental contra la Leptospirosis, que se celebró en la ciudad del Rio de Janeiro (Brasil), del 10 al 12 de noviembre del 2015. El evento se centró en las políticas de salud y en la elaboración de una hoja de ruta que sirviese como un documento guía consensuado para la toma de decisiones de los formuladores de políticas, los organismos de financiamiento y los profesionales de la salud. Se hizo hincapié en la dirección que tiene que tomar la investigación sobre la leptospirosis en los próximos años, en la que se deben tener en cuenta las necesidades de los países de América Latina, así como a las experiencias de otras regiones del mundo, de acuerdo con las consideraciones de los expertos internacionales. Los conceptos operativos de “Una sola salud” y de la investigación traslacional fueron la base de los debates y de las recomendaciones resultantes. A pesar de la extensa distribución geográfica de la leptospirosis y su repercusión desde el punto de vista de la incidencia, la morbilidad y la mortalidad, la leptospirosis no se considera todavía una enfermedad con herramientas listas para ser aplicadas (tool-ready) en las iniciativas a nivel mundial. Los programas de vigilancia necesitan herramientas y estrategias nuevas para llevar a cabo la detección temprana, la prevención y el seguimiento. Las recomendaciones principales que se emitieron en la reunión de Rio cubrieron tanto el ámbito de las políticas de salud como el de la investigación. Las recomendaciones que se refieren a las políticas de salud deben ser tenidas en cuenta por los encargados de tomar decisiones, los funcionarios de gobierno y la Organización Panamericana de la Salud. Las prioridades de la investigación, el desarrollo tecnológico y la innovación deben ser incorporadas por las instituciones de investigación, las universidades y los interesados directos.

RESUMO Objetivos Demonstrar a importância dos sistemas nacionais de vigilância para a leptospirose e seu uso na análise epidemiológica preliminar, além de gerar perguntas de pesquisa para futuros estudos mais aprofundados sobre a doença. Métodos Em 2015, a Organização Pan-Americana da Saúde (OPAS) incluiu, pela primeira vez, casos humanos de leptospirose em sua Iniciativa Regional de Dados Básicos de Saúde, uma base de dados de acesso aberto que coleta indicadores de saúde anuais nos países e territórios das Américas. Utilizamos estas novas informações para analisar os casos de leptospirose por país e por sexo e calcular as taxas de incidência acumuladas. A apresentação dos dados é facilitada pelo uso de mapas. Para complementar esta revisão geral da leptospirose nas Américas, apresentamos descrições mais detalhadas da situação epidemiológica e dos programas de vigilância de quatro países selecionados (Brasil, Colômbia, Cuba e Honduras). Resultados Neste primeiro ano em que a OPAS solicitou dados sobre a leptospirose, 38 dos 49 países e territórios das Américas (77,6%) apresentaram informações. Destes 38, 28 (73,7%) notificaram a presença de casos humanos; em sua maioria, os que não apresentaram nenhum caso foram territórios do Caribe. Dentre os 28, foi registrado um total de 10.702 casos humanos. O maior número de casos na América Latina foi observado no Brasil (40,2%), Peru (23,6%), Colômbia (8,8%) e Equador (7,2%). A taxa de incidência acumulada para a América Latina foi estimada em 2,0 por 100.000 habitantes. Em média, 65,1% dos casos foram em homens. Conclusões Este estudo demonstra que muitos países da América Latina estão fazendo esforços para estabelecer fortes sistemas de vigilância e programas contra a leptospirose. O estudo também revela a importância da existência de sistemas de vigilância para a leptospirose e demonstra que as informações geradas podem ser usadas para a tomada de decisões baseadas em evidências científicas para a leptospirose.

ABSTRACT Objectives To demonstrate the importance of country surveillance systems for leptospirosis and their use for preliminary epidemiological analysis, as well as to generate research questions for future, more comprehensive studies on the disease. Methods In 2015, for the first time, the Pan American Health Organization (PAHO) included human cases of leptospirosis in its Regional Core Health Data Initiative, an open-access database that collects annual health indicators from the countries and territories of the Americas. This new information was used to analyze leptospirosis cases by country and sex and to calculate cumulative incidence rates. Maps were used to help present the results. To supplement that general review of leptospirosis in the Americas, more detailed descriptions of the epidemiological situation and the surveillance programs of four selected countries (Brazil, Colombia, Cuba, and Honduras) were provided. Results In this first year of PAHO requesting leptospirosis data, of the 49 countries and territories in the Americas, 38 of them (77.6%) reported information. Among those 38, 28 of them (73.7%) reported the presence of human cases; the majority of instances of zero cases were in Caribbean territories. From those 28, a total of 10 702 human cases were recorded. The largest numbers of cases in Latin America were in Brazil (40.2%), Peru (23.6%), Colombia (8.8%), and Ecuador (7.2%). The cumulative incidence rate for Latin America was estimated to be 2.0 per 100 000 population. On average, 65.1% of cases were males. Conclusions This study demonstrates that many countries in Latin America are making efforts to establish strong surveillance systems and programs for leptospirosis. The study also shows the importance of having leptospirosis surveillance systems as well as how the information generated can be used for evidence-based decision-making on leptospirosis.

RESUMEN Objetivos Demostrar la importancia de los sistemas nacionales de vigilancia de la leptospirosis y su uso para realizar el análisis epidemiológico preliminar, así como para generar preguntas de investigación que se utilicen en futuros estudios más integrales sobre la enfermedad. Métodos En el año 2015, la Organización Panamericana de la Salud (OPS) incluyó por primera vez casos humanos de leptospirosis en su Iniciativa Regional de Datos Básicos de Salud, base de datos de acceso abierto que recoge indicadores de salud anuales de los países y territorios de la Región de las Américas. Esta nueva información fue utilizada para analizar los casos de leptospirosis por país y sexo, así como para calcular las tasas de incidencia acumulada, y los resultados se presentaron en mapas. Para complementar ese examen general de la leptospirosis en esta Región, se aportó una descripción más detallada de la situación epidemiológica y los programas de vigilancia de cuatro países (Brasil, Colombia, Cuba y Honduras). Resultados En este primer año en que la OPS solicitó datos sobre la leptospirosis, de los 49 países y territorios en la Región de las Américas, aportaron información 38 (77,6 %). De esos 38, 28 (73,7 %) notificaron casos humanos; la mayor parte de las instancias sin ningún caso humano se registraron en territorios del Caribe. En esos 28 países y territorios, se registraron 10 702 casos humanos. En América Latina, los países que registraron los números más altos de casos fueron Brasil (40,2 %), Perú (23,6 %), Colombia (8,8 %) y Ecuador (7,2 %). Se calculó que la tasa de incidencia acumulada de América Latina es de 2,0 por 100 000 habitantes. En promedio, 65,1 % de los casos correspondieron a hombres. Conclusiones Este estudio demuestra que muchos países de América Latina están tomando medidas para instaurar sistemas y programas sólidos de vigilancia de la leptospirosis. Asimismo, revela la importancia de los sistemas de vigilancia de la leptospirosis, así como el modo en que la información generada puede servir para tomar decisiones basadas en la evidencia acerca de esta enfermedad.

INTRODUÇÃO: Leptospirose é uma zoonose que permanece endêmica em regiões tropicais e temperadas. A dificuldade no diagnóstico clínico diferencial entre os quadros de leptospirose humana e as várias arboviroses (dengue, febre amarela, febre de oropouche), febre maculosa brasileira, hepatite viral e hantavirose permanece um problema na Saúde Pública. MÉTODOS: No presente estudo, foi realizada análise retrospectiva de características demográficas, epidemiológicas, clínicas e laboratoriais de 27 casos de leptospirose humana que ocorrerem durante um período de 13 anos sem ocorrência de notificação de surtos epidêmicos no Rio de Janeiro, Brasil (1996-2009). RESULTADOS: A mortalidade da coorte de pacientes com leptospirose correspondeu a 11,1%, sem embargo, o grupo de pacientes com atipia linfocitária não evoluiu para o óbito (OR = 11,1; 95% CI = 1,12-110,9; p = 0.04). Em duas oportunidades, foi observada uma expansão dos linfócitos T gama-delta no sangue periférico de pacientes na fase septicêmica da leptospirose. CONCLUSÕES: Atipia linfocitária pode ocorrer em pacientes com leptospirose. Nossos dados também sugerem que os linfócitos atípicos podem estar envolvidos na patogênese da leptospirose.

INTRODUCTION: Leptospirosis is a zoonotic disease found in tropical and temperate countries, and its clinical diagnostic confusion with arboviruses (dengue fever, oropouche fever and yellow fever), Brazilian spotted fever, viral hepatitis and hantaviruses has been an ongoing public health concern. The aim of this observational study was to demonstrate an association between findings of atypical lymphocytosis and the progression of endemic leptospirosis. METHODS: A retrospective analysis was performed on the demographic, epidemiological, clinical and laboratory aspects of 27 human leptospirosis cases that occurred over a period of 13 years (1996-2009) with no reported epidemic outbreaks in Rio de Janeiro, Brazil. RESULTS: The overall mortality rate was 11.1% in our cohort of hospitalized cases. However, there was no mortality among patients with atypical lymphocytosis (OR = 11.1; 95% CI = 1.12-110.9; p = 0.04). Two patients who were in the septicemic phase showed signs of expansion of γδ T cell responses in peripheral blood. CONCLUSIONS: Atypical lymphocytosis may be observed in patients with leptospirosis. Our observations suggest that these atypical leukocyte subsets are associated with partial protection during the disease course of leptospirosis.

The aim of this study was to apply a molecular protocol to detect leptospiral DNA in environmental water samples. The study was carried out in a peri-urban settlement in Petrópolis, state of Rio de Janeiro. A multiplex PCR method employing the primers LipL32 and 16SrRNA was used. Three out of 100 analysed samples were positive in the multiplex PCR, two were considered to have saprophytic leptospires and one had pathogenic leptospires. The results obtained supported the idea that multiplex PCR can be used to detect Leptospira spp in water samples. This method was also able to differentiate between saprophytic and pathogenic leptospires and was able to do so much more easily than conventional methodologies.

INTRODUÇÃO: A leptospirose é uma zoonose endêmica, mundialmente distribuída, causada por bactérias do gênero Leptospira. Este gênero compreende espécies patogênicas e saprofíticas, com mais de 200 sorovares distintos, dificultando sua caracterização. A técnica de pulsed field gel electrophoresis tem sido empregada como uma ferramenta para auxiliar nesta caracterização. Os objetivos deste trabalho foram padronizar a técnica de PFGE, determinar os perfis moleculares das cepas de referência utilizadas pelo Laboratório de Referência Nacional para Leptospirose/Centro Colaborador da Organização Mundial de Saúde para Leptospirose e criar um banco de dados com estes perfis. MÉTODOS: Foram analisadas, por PFGE, dezenove cepas utilizando a enzima de restrição NotI. RESULTADOS: Cada cepa apresentou um perfil único que pode ser considerado como uma identidade genômica específica, com exceção dos sorovares Icterohaemorrhagiae e Copenhageni, cujos perfis foram indistinguíveis. CONCLUSÕES: Dessa forma, foi possível a criação de um banco de perfis moleculares que está sendo utilizado no Laboratório para a comparação e identificação de cepas isoladas de quadros clínicos.

INTRODUCTION: Leptospirosis is an endemic zoonosis of worldwide distribution, caused by bacteria of the genus Leptospira. This genus includes pathogenic and saprophytic species, with more than 200 different serovars, thus making it difficult to characterize. The technique of pulsed field gel electrophoresis has been used as a tool to aid in this characterization. The aims of this study were to standardize the PFGE technique, determine the molecular profiles of reference strains used at the National Reference Laboratory for Leptospirosis/World Health Organization Collaborating Center for Leptospirosis and create a database with these profiles. METHODS: Nineteen strains were analyzed by means of PFGE, using the restriction enzyme NotI. RESULTS: Each strain presented a unique profile that could be considered to be a specific genomic identity, with the exception of the serovars Icterohaemorrhagiae and Copenhageni, whose profiles were indistinguishable. CONCLUSIONS: It was possible to create a database of molecular profiles, which are being used in the Laboratory for comparing and identifying strains isolated from clinical cases.

Considerando a carência de dados clínicos e epidemiológicos da leptospirose humana no Estado de Mato Grosso do Sul e a possibilidade de confusão com outras doenças, soros de pacientes com suspeita clínica inicial de dengue e hepatite viral, porém, sem confirmação laboratorial, foram examinados, através de soroaglutinação microscópica para leptospirose. Os índices de sororreagentes nas amostras com suspeita clínica de dengue e hepatite viral foram, respectivamente, 15,9% e 9%. A maior ocorrência foi para o sorovar hurstbridge (70,4%) e o maior título para o sorovar canicola (1:51. 200). Não se observou associação entre positividade e sexo, idade ou ocupação dos pacientes. O estudo demonstrou que, embora as atuais notificações de casos de leptospirose em Mato Grosso do Sul sejam irrisórias, a prevalência de anticorpos foi elevada nos grupos investigados e, portanto, a hipótese de subnotificação de casos de leptospirose humana em Mato Grosso do Sul e dificuldades no diagnóstico diferencial com dengue e hepatite viral devem ser consideradas.

In view of the lack of clinical and epidemiological data on human leptospirosis in the State of Mato Grosso do Sul, and the possibility of confounding it with other diseases, sera from patients with a preliminary clinical suspicion of dengue or viral hepatitis but without laboratory confirmation were examined by means of microscopic seroagglutination techniques for leptospirosis. The seroreactivity rates among the samples with clinically suspected dengue or viral hepatitis were 15. 9% and 9%. The most frequent serovar was Hurstbridge (70. 4%) and the serovar with the highest titer was Canicola (1:51,200). No association was found between seropositivity and the patients’ sex, age or occupation. This study demonstrated that, although the present notifications of leptospirosis cases in Mato Grosso do Sul are negligible, the prevalence of antibodies was high in the groups investigated. Therefore, the hypothesis that there is undernotification of human leptospirosis cases in this State and difficulties in the differential diagnosis between dengue and viral hepatitis should be considered.

São descritos quatro casos da forma pulmonar grave da leptospirose (FPGL). Nestes quatro casos confirmados por hemocultura, observou-se grave acometimento pulmonar, caracterizado por hemorragia alveolar e insuficiência respiratória aguda. Três pacientes evoluíram para o óbito em menos de 48 horas após a instalação do quadro respiratório. A detecção por imunoperoxidase de antígenos de leptospira no tecido pulmonar foi positiva nestes três pacientes, sugerindo ação lesiva direta deste microrganismo. Os autores destacam a importância do diagnóstico clínico precoce, baseado nos achados radiológicos e de gasometria arterial, e sugerem que os corticosteróides, associados à antibioterapia, à assistência ventilatória precoce e à transfusão de plaquetas, são úteis na tentativa de impedir a instalação de grave hemorragia alveolar seguida de insuficiência respiratória e morte.

Four cases of severe pulmonary form of leptospirosis (SPFL) are described. In all four of these blood culture proven cases, there was severe pulmonary injury characterized by alveolar hemorrhage and acute respiratory failure. Three patients died in less than 48 hours after onset of the first respiratory signs. Leptospiral antigen detection in lung tissues was positive by immunoperoxidase in all three of these cases, suggesting that the microorganism exerts a local direct destructive action. Patients with SPFL should be carefully monitored, as the abrupt onset of severe alveolar hemorrhage can lead to respiratory insufficiency and death. The authors emphasize the importance of radiological findings and blood gas analysis for prompt clinical diagnosis, and suggest that corticosteroids, associated with antibiotics, early respiratory support, and platelet transfusions are useful as an attempt to prevent further development of SPFL.

Os autores relatam um caso de forma íctero- hemorrágica de leptospirose ocorrida em paciente com síndrome de imunodeficiência adquirida (SIDA). A evolução clínica da leptospirose se deu de modo semelhante ao observado em pacientes sem imunodepressão, apesar dos níveis muito baixos de linfócitos TCD4+. Tampouco houve agravamento da SIDA em decorrência da infecção pelo espiroqueta. Observou-se conversão sorológica na prova de aglutinaçãomicroscópica com títulos máximos de 1:3.200. O paciente permaneceu por dois meses com urinocultura positiva para Leptospira interrogans, sendo as hemoculturas negativas.

A case of renal icterohaemorrhagic leptospirosis involving a patient with acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) is reported. Despite the low levels of CD4+ Tlymphocytes, the clinical course of leptospirosis was similar to that observed in non-immunodepressed patients, and no worsening of AIDS occurred due to the infebtion by the spirochete. Serologic conversion was observed in the microscopic agglutination test, with maximum titer of1:3,200. The patient had positive urine cultures for Leptospira interrogans for two months, whereas blood cultures were negative.

Afim de obter dados sobre as manifestações clínicas da leptospirose em crianças, foram revistos 188 exames sorológicos realizados em pacientes com idade entre 0 e 12 anos no Laboratório de Referência Nacional para Leptospirose (FIOCRUZ-RJ) no período de janeiro de 1983 ajunho de 1991. Cinquenta e dois (27,6%) soros eram reagentes. Vinte etrês (12,2%) crianças tinham evidênciasorológica de infecção aguda. Os sinais e sintomas mais freqüentemente encontrados nestes casos foram: febre (100%); mialgias (69,5%); cefaléia (52,1%); icterícia (47,8%); vômitos (34,8%); dores abdominais, manifestações hemorrágicas e disfunção renal (17,4%); conjuntivite (13%); hepatomegalia (4,3%).

In order to obtain data about clinical manifestations of symptomatic leptospiral infection in children, the authors reviewed 188 microscopic agglutination tests performed on sera of patients aged 0 to 12 years, made at the National Reference Laboratory of Leptospirosis (FIOCRUZ-RJ) from January 1983 to June 1991. Fifty two (27.6%) sera were positive. Twenty three (12.2%) children had serological evidence of acute infection. The mostfrequent signs and symptoms of these 23 cases were: fever (100%); myalgia (69.5%); headache (52.1%); jaundice (47.8%); vomit (34.8%); abdominal pain, hemorrhagic manifestations and impaired renal function (17.4%); conjunctivitis (13%); hepatomegaly (4.3%).